Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者实质性缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次再次出现肝细胞自身抗原到再次出现1型式冠心病临床研究病症的困难重重率在青少年中会后期就有很好的刻画，多个肝细胞自身抗原无症状的青少年中会有70%在血清转化后10年内罹患冠心病，而随访15年的青少年这一%上升到84%。相对来说之下，占去临床研究1型式冠心病一半以上的型式1型式冠心病的确诊机制还没有获取适当的全面性研究。

越来越多的人开始用到分期系统来定义1型式冠心病的困难重重：群纤在再次出现多种肝细胞自身抗原时进入第1前期，再次出现血糖异常时进入第2前期，再次出现病症时进入第3前期。一些多发肝细胞自身抗原无症状的群纤，在1期和2期，困难重重较慢，并发展为确诊的1型式冠心病。我们早先刻画了除此以外成员在首次扫描到多种肝细胞自身抗原抽样后至更少10年无冠心病的近于慢困难重重者，这组成员病症总数更少，但基本特征并不恰当。随后，我们发现肝细胞自身淋巴巨噬细胞特异性CD8+T巨噬细胞反不应会在困难重重快速的病症中会基本不实际上，但在近期确诊和长期实际上的冠心病病症中会很容易扫描到。这可能声称，与困难重重病症相对来说，这些病症化脓性反不应会的可调进一步提高。

最初全面性研究声称，尽管可调性T巨噬细胞(Treg)数量正常，但冠心病病症实际上一些新功能不足之处，其中会还包括对IL-2的反不应会能力减缓。此外，冠心病病症中会的效不应CD4+T巨噬细胞可能对可调更具抵抗性，表现为效不应T巨噬细胞的抑止减弱，其本质归因于的Treg和纤外归因于的诱导Treg，以及淋巴巨噬细胞经历的CD4+T巨噬细胞中会IL-2反不应会减弱。本全面性研究的目的是刻画了CD4+可调性T巨噬细胞(Treg)在一小群近于快速困难重重者中会的基本特征，他们的同期为43岁(31-72岁)，随访时长为18-32年。

方法：BOX全面性研究是一项以人群为基础的纵向全面性研究，在21岁表列确诊的病症亲属中会扫描1型式冠心病的危险因素。我们早先刻画了长期快速困难重重者的基本特征，他们保持稳定多重肝细胞自身抗原无症状大约10年，但没有再次出现冠心病的临床研究病症，慢性或非同步进行性化脓性。随后，10名暂时保持稳定无冠心病并愿意缺少大量血液抽样的快速困难重重者扩及T和B巨噬细胞新功能比对。在迄今的全面性研究中会，8名慢困难重重者(SP组成员)，中会位年岁43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的肝细胞自身抗原无症状。所有的参与者都处于1型式冠心病困难重重的1期，尽管一些人随后失去了肝细胞自身抗原对某些淋巴巨噬细胞的无症状反不应会，然而，一名病症已经处于2期至更少6年，但没有再次出现临床研究病症，一名病症被确诊为冠心病，该受测者72岁，在捕获实验抽样时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在科研人员中会对该丝氨酸同步进行了之外指标。分离外周血单个氢巨噬细胞(PBMCs)，用到多给定流式巨噬细胞法术和T巨噬细胞抑止测试指标丝氨酸中会Treg的增益、环境因素式和新功能。用到FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、表征和回归)同步进行无监督聚类比对，指标Treg环境因素式。

结果：与保健丝氨酸相对来说，来自慢困难重重纤的心灵CD4+T巨噬细胞的监督聚类看出，作用于的心灵CD4+ Treg增益上升，与止痛药诱导的TNFR相关蛋白(GITR)理解上升有关。一名HbA1c升高的病症与困难重重快速者和匹配的印证组成员相对来说，Treg曲谱有所各有不同。新功能比对声称，与保健丝氨酸相对来说，来自快速困难重重纤的Treg介导的CD4+效不应T巨噬细胞抑止引人注意受损。表现为对效不应CD4+T巨噬细胞CD25和CD134理解的抑止上升。

平面图1 全面性的环境因素式比对看出，CD4+Treg亚型式在慢困难重重队列中会上升。由FlowSOM转化的Treg室，围住在来自所有丝氨酸的活CD4+CD45RA -巨噬细胞上。根据标明物理解鉴定出10个元簇:心灵T巨噬细胞_1;心灵T cell_2;心灵T cell_3;心灵T cell_4;CD49b心灵T巨噬细胞;HLA-DR + GITR +心灵T巨噬细胞;文件系统Treg_1;文件系统Treg_2;文件系统Treg_3;和文件系统Treg_4。(a)用到9个各有不同Treg标明转化的10个元簇的MST。每个结点代表者一个空降兵(100个空降兵)，相当大的元空降兵(10个元空降兵)在结点组成员周围上色。每个结点中会的饼平面图坚称单个标明的理解级别。(b)每个元聚类的热平面图，以看出整纤标明理解。(c, d)为HD组成员(c)和SP组成员(d)转化平面图，以及FlowSOM辨识的每个元簇的表层。(e-l)相较稀土元素为每个metacluster箱中会央线平面图(稀土元素> 0.05%)确认为HD和SP组成员:文件系统Treg_2 (e),文件系统Treg_3 (f),文件系统Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +心灵T巨噬细胞(h)、心灵T cell_1(i),心灵T cell_2 (j),心灵T cell_3 (k) n d CD49b心灵T巨噬细胞(l)。黄色红色代表者**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon筛选符号秩检测。此键适用于平面图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

平面图2 用到CITRUS的预测模型式证实，Treg增益的上升是困难重重快速的标志。国际标准门控(a - f)和柑桔比对(g-k)并不SP参与者和匹配的HD参与者在CD4+CD45RA−T巨噬细胞上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群纤的代表者性平面图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3掺入，然后通过HLA-DR和GITR理解同步进行分离，精心设计FlowSOM群纤。(b) HD(网纹)和SP(黑斑)组成员以及丝氨酸SP 606(黄色)中会CD25+ cd127的增益简介平面图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控叔父集的箱中会央线平面图;(c) HLA-DRloGITR−(文件系统Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(文件系统Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(文件系统Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+文件系统T cell)。(g - i)柑桔簇锥形由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3理解强度可视，箭头突出的簇被辨识为SP和HD队列之间的各有不同。(j)箱中会央线平面图看出了在SP(黑斑)和HD(灰点)组成员中会，CITRUS心灵Treg_3和Treg_4的相较稀土元素(%)。(k)直方平面图看出每个簇的环境因素式(暗红色)和Treg标明相较理解与文化背景理解(红色);上列，文件系统Treg_3;下面一行，文件系统Treg_4。文化背景与所有其他簇中会标明的理解有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon筛选符号秩检测

平面图3 与保健献血者相对来说，困难重重快速者心灵treg的GITR上升。每个心灵CD4+T巨噬细胞元簇(心灵T巨噬细胞_1;心灵T cell_2;心灵T cell_3;CD49b +心灵T巨噬细胞;HLA-DR + GITR +心灵T巨噬细胞;文件系统Treg_2;文件系统Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)扫描每个理解标明的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)队列的理解热平面图(sp606不还包括在内)。(c,d)心灵Treg_4元簇中会所有HD(灰色)、所有SP(红色)和SP 606(黄色)的FlowSOM GITR理解并联，看出直方平面图(c)和简介平面图(d)。Wilcoxon筛选符号秩和检测，p< 0.07(黄色)所有丝氨酸还包括，p< 0.05(红色)丝氨酸SP 606和匹配的HD不还包括在测试中会。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中会GITR理解，从国际标准门控，从所有HD(灰色)、所有SP(红色)和SP 606(黄色)并联，看出直方平面图(e)和简介平面图(f) *p< 0.05, Wilcoxon筛选符号秩检测

平面图4 来自快速困难重重的CD4+ treg巨噬细胞控制效不应CD4+T巨噬细胞的能力减缓。SP组成员用红色的中会央线和红色坚称，HD组成员用灰色的中会央线和红色坚称，黄色的中会央线/红色坚称丝氨酸sp606。用到CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T巨噬细胞同步进行分选。CD4+CD25−(不接收者者)被标明为CFSE, Treg按观察的%起始。用抗CD3 /28微珠再生巨噬细胞，培养出来3当晚同步进行流式巨噬细胞法术扫描。(a-d)与CD4+不接收者者相较不应的treg培养出来(暂时性)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD不接收者者培养出来。(a,b,f) CFSE增生(a,e)和CFSE抑止比例(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的抑止比例。用到无症状印证(作用于的声势浩大巨噬细胞不含treg)量度抑止比例。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差比对。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重并不测试

平面图5 效不应CD4+T巨噬细胞对快速困难重重的T巨噬细胞再生的抑止更引人注意。SP组成员用红色的中会央线和红色坚称，HD组成员用灰色的中会央线和红色坚称，黄色的中会央线/红色坚称丝氨酸sp606。用到CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T巨噬细胞同步进行分选。CD4+CD25−(不接收者者)被cfsel标明，treg按观察的%起始。用抗CD3 /28微珠再生巨噬细胞，培养出来3当晚同步进行流式巨噬细胞法术(CD25反染)和炎症比对。HD Treg与HD、SP或sp606不接收者者共同培养出来。(a,b) CFSE增生(a)和CFSE抑止调升(b)。(c,d) CD25抑止调升(c)和CD134抑止调升(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在名教授出来中会的理解。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差比对。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重并不测试

结论：我们算出的结论是，来自快速困难重重叔父的再生心灵CD4+Treg在GITR理解中会获取了扩大和丰富多彩，凸显了进一步全面性研究Treg在1型式冠心病安全性群纤中会的差异性的不足之处。

原文出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28